長(zhǎng)春水套式CO2培養(yǎng)箱HH.CP-TW細(xì)胞培養(yǎng)

包括營(yíng)養(yǎng)液、胰酶、清等。

清特別重要。清必須貯存于 –20℃，如果一次無(wú)法用完一瓶，可將 40～50ml 分裝于無(wú)菌酸處理瓶中，甚至置青霉素瓶保存。一般廠商提供的清為無(wú)菌，不需再無(wú)菌過(guò)濾。若發(fā)現(xiàn)清有許多懸浮物，則可將清加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過(guò)濾，勿直接過(guò)濾清。（一般情況下不影響細(xì)胞培養(yǎng)）

瓶裝清一定要逐步解凍: 4℃ 冰箱全溶后再分裝，在溶解過(guò)程中須規(guī)則搖晃均勻(小心勿造成氣泡)，使溫度與成分均一，減少沉淀的發(fā)生。勿直接由 –20℃ 直接至 37℃ 解凍，因溫度改變太大，容易造成蛋白質(zhì)凝結(jié)而發(fā)生沉淀。

熱滅活是指 56℃，30 分鐘加熱已*解凍之清。水浴鍋升到 56℃后，將清放入，待溫度升高到 56℃ 后計(jì)時(shí)，一般 5 分鐘左右規(guī)則搖晃均勻一次。此熱處理之目的是使清中之補(bǔ)體成份去活化。除非必須，一般不要作此熱處理，因?yàn)闀?huì)造成沉淀物之顯著增多，且會(huì)影響清之品質(zhì)。注意更換新清（包括不同批次）對(duì)細(xì)胞的影響。

7、無(wú)菌意識(shí)要強(qiáng)

實(shí)驗(yàn)進(jìn)行前，超凈臺(tái)以紫外燈照射 30 分鐘滅菌，以 70 % ethanol 擦拭無(wú)菌操作抬面，并開(kāi)啟超凈工作臺(tái)風(fēng)扇運(yùn)轉(zhuǎn)數(shù)分鐘后，才開(kāi)始實(shí)驗(yàn)操作。

每次操作只處理一株細(xì)胞株，以避免失誤混淆或細(xì)胞間污染。實(shí)驗(yàn)完畢后，將實(shí)驗(yàn)物品帶出工作臺(tái)，以 70 % ethanol 擦拭無(wú)菌操作抬面。

無(wú)菌操作工作區(qū)域應(yīng)保持清潔及寬敞，必要物品，例如支架、吸管等公用物品可以暫時(shí)放置，其它個(gè)人實(shí)驗(yàn)用品用完應(yīng)立即拿出。實(shí)驗(yàn)用品以 70% 乙醇擦拭后才帶入無(wú)菌操作臺(tái)內(nèi)。實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在中央無(wú)菌區(qū)域，一般勿在邊緣區(qū)域操作。

小心取用無(wú)菌之實(shí)驗(yàn)物品，避免造成污染。勿碰觸吸管尖頭部或是容器瓶口，亦不要在打開(kāi)之容器正上方操作實(shí)驗(yàn)。容器打開(kāi)后，以手夾住瓶蓋并握住瓶身，傾斜約 45° 角取用，盡量勿將瓶蓋蓋口朝上放置桌面。

長(zhǎng)春水套式CO2培養(yǎng)箱HH.CP-TW細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)參數(shù):

準(zhǔn)備

    細(xì)胞凍存液（20%清、10%DMSO、70%基礎(chǔ)培養(yǎng)液），梯度降溫盒

（2） 步驟

        1.選取活力好，密度約70%細(xì)胞用于凍存，此時(shí)細(xì)胞處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，適合用于凍存。

        2 .細(xì)胞吹打或者胰酶消化后，轉(zhuǎn)移至無(wú)菌EP管，1000rpm里面5min。

        3.棄上清，加入新鮮配制的細(xì)胞凍存液，25T細(xì)胞可以加入2ml細(xì)胞凍存液，分裝2個(gè)凍存管，細(xì)胞密度為5*106-1*107個(gè)每ml。

        4.做好標(biāo)記，放入梯度降溫盒（提前平衡至室溫）。

        5.將梯度降溫盒放入-80℃冰箱過(guò)夜，第二天取出凍存管，快速放入液氮保存。

氧化碳培養(yǎng)箱是進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)的必要設(shè)備，那么在培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)有哪些經(jīng)驗(yàn)是我們可以借鑒的呢？下面讓我們一起來(lái)看一下。

1、啟蒙老師的重要性

一般進(jìn)實(shí)驗(yàn)室都有師兄師姐帶著做，他們就是你做細(xì)胞的啟蒙老師。他們的操作手法、細(xì)節(jié)、理論講解就成了你操作的準(zhǔn)則，如營(yíng)養(yǎng)液、細(xì)胞瓶的擺放位置；滅菌處理程序；開(kāi)蓋手法；細(xì)胞吹打手法等等。要學(xué)會(huì)他們的正確操作，在*次的時(shí)候就要重視。

2、像養(yǎng)孩子一樣養(yǎng)細(xì)胞

細(xì)胞真的很脆弱，每天都去看看它，以防止出現(xiàn)培養(yǎng)箱缺水、缺二氧化碳、停電、溫度不夠等異?，F(xiàn)象，也好及時(shí)解決這些意外，避免重復(fù)實(shí)驗(yàn)帶來(lái)的更大痛苦。

3、好細(xì)胞要及時(shí)保種

細(xì)胞要分批傳代，這樣即使有一批出了問(wèn)題，還有一批備用的。像后者一般人可能不容易做到。有一次細(xì)胞污染了，全軍覆沒(méi)。當(dāng)時(shí)可后悔沒(méi)有保種。

4、每種細(xì)胞都有自己的特性，要區(qū)別對(duì)待。

細(xì)胞跟人一樣，不同的細(xì)胞，培養(yǎng)特性是不一樣的。培養(yǎng)過(guò)程中要細(xì)細(xì)體會(huì)。不同細(xì)胞株使用不同的培養(yǎng)基和清。

如平滑肌細(xì)胞很活躍，喜歡熱鬧，2~3 天就好多人口，而且不太愛(ài)吃喝，真是養(yǎng)的孩子了。內(nèi)皮細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞性格相近，不過(guò)它很不講，也很邋遢，里面有很多分泌屋，要經(jīng)常換洗才行。RAW264.7 細(xì)胞也很開(kāi)朗，而且很能吃，要經(jīng)常喂它，頭疼的是細(xì)胞很容易活化，培養(yǎng)它的瓶子和環(huán)境沒(méi)有內(nèi)毒素才好。